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Beadose琼脂糖是一种珠状琼脂糖凝胶过滤介质，有两种不同的琼脂糖含量：4%和6%，分别命名为Beadose 4B琼脂糖和Beadose 6B琼脂糖。Beadose CL琼脂糖是Beadose 4B和Beadose 6B的交联衍生物。在化学性质和物理性质上交联形式的琼脂糖比琼脂糖本身更具抗性，具有更好的流动特性，同时具有相同的选择性。交联的琼脂糖凝胶耐有机溶剂，因此可以在有机溶剂体系中进行实验。Beadose琼脂糖和Beadose CL琼脂糖都具有广泛的分馏范围，能够适用于表征或清除含有不同分子量成分的样品。

树脂	Beadose 4B琼脂糖	Beadose 6B琼脂糖	Beadose CL- 4B琼脂糖	Beadose CL-6B琼脂糖
产品货号	GS4369	GS4381	GS4389	GS4401
成分	4% Agarose	6% Agarose	4% Agarose	6% Agarose
平均粒径	45～165μm	45～165μm	45～165μm	45～165μm
分离范围	7×104～2×107	1×104～4×106	7×104～2×107	1×104～4×106
pH稳定性	4～9	4～9	3～13	3～13
推荐线性流速	11cm/h	14cm/h	26cm/h	30cm/h
化学稳定性	包括8M尿素和6M盐酸胍的凝胶过滤常用的溶液都稳定。		包括8M尿素和6M盐酸胍的凝胶过滤常用的溶液都稳定。同时在有机溶剂如乙醇，DMF，THE，丙酮，DMS，氯仿，二氯甲烷，二氯乙烷，吡啶，磷酸三乙酯和乙腈中也稳定。
物理稳定性	由于pH或离子强度的变化导致的体积变化可忽略不计
灭菌	化学方法		高压灭菌，120℃，20min

组分	100mL	500mL
Beadose 4B琼脂糖	100mL	500mL
说明书	1份	1份

保存：2～8℃，不可冻存


线性流速(cm/h) =体积流速(cm³/h)/柱横截面积(cm²)

胶悬液体积(mL)=装柱体积(mL)×填料压缩因子/胶悬液浓度

例如：已知填料的压缩因子为1.15，现有胶悬液浓度50%，若需要装填60mL柱子，通过公式可以计算需要胶悬液体积138mL。

填充Beadose和Beadose CL凝胶
下面列出的柱料填充分为两步。第二步应在Table 2给出的恒定压力下进行。分离效果会因凝胶过滤中床层高度的增加而增大。因此建议选择至少60cm的凝胶床高度。
表2．建议填充流速和压力

凝胶	步骤1流速(cm/h)	步骤2压力(MPa,bar,psi)
Beadose 4B	15	0.018，0.18，2.6
Beadose 6B	30	0.025，0.25，3.6
Beadose CL-4B	30	0.025，0.25，3.6
Beadose CL-6B	30	0.045，0.45，6.4

层析柱装填(使用悬液储液器)：

• 第一步先将所有试剂和材料温度平衡至凝胶过滤实验所需的温度。
  
• 先用去离子水冲洗底部筛板与适配器接头，确保底部筛板无气泡，与玻璃装柱管相连并旋紧适配器接头，向其加入1~2cm高去离子水(其目的为了防止产生气泡)。
  
• 将玻璃装柱管垂直安装在铁架台上，确保底部及筛板无空气。
  
• 将树脂填料混悬后缓慢加入玻璃柱内或用玻璃棒引流至柱中，减少气泡进入。
  
• 如果使用悬液储液器，应立即将层析柱与悬液储液器相连接，将柱料从悬液储液器中加入(可以使用玻璃棒引流)，再向其中补满装柱缓冲液(20%乙醇或去离子水)，全程要缓慢加入，避免产生气泡。
  
• 第二步打开层析柱底部出口，开启泵(可以是蠕动泵或AKTA)，参考Table 2中建议的流速使其在设定流速下进行。开始先让缓冲液缓慢流过层析柱，然后缓慢增加至最终流速，这样可避免液压对所形成柱床的冲击，也可以避免柱床形成的不均匀。如果达不到推荐的压力或流速，可以用你所使用泵的最大流速，这样也可以得到一个很好的装填效果。(注意：在随后的色谱程序中，不要超过最大装柱流速的75%)当柱床高度稳定后，在最后的装柱流速下至少再上3倍柱床体积的去离子水。在层析柱上用记号笔标上柱床高度。
  
• 关闭泵，关闭层析柱出口。
  
• 如果使用悬液储液器，请先去除悬液储液器，用滴管将层析柱头液体补齐。
  
• 用注射器与顶端适配器相连，打入20%乙醇缓冲液将适配器中空气排净，将顶端适配器与层析柱相连，拧紧顶部填充容器盖，缓慢旋转螺母使顶端适配器下移，将适配器旋转到柱床高度下2～3mm处并拧紧。
  
• 打开柱底部出口，并按照Table 2中步骤1的流速启动泵。
  
• 填充凝胶直到凝胶床达到恒定的高度。
  
• 停止泵，并关闭柱子出口，取下与泵的连接器，这时层析柱已经装填完毕进行后续实验操作。
  
• 如果需要检验层析柱的质量，应进行柱效测试，以确定理论塔板数和峰不对称系数。

分离条件
建议使用离子强度≥0.15的缓冲液，以避免溶质分子和凝胶基质之间的离子相互作用。对于各种智能琼脂糖凝胶的推荐流速，请参见基本信息，流速越低分离效果越好。

洗脱液和样品准备
为了避免凝胶柱的过滤器堵塞，建议过滤或离心样品，去除颗粒物。

柱的平衡
在加入样品之前，用至少两个柱体积的洗脱液(去离子水)来平衡，或直到基线稳定。含去垢剂的溶液可能需要平衡更长的时间。

上样
推荐样品量为总凝胶柱床容量的2～5%。可以通过样品施加器或带阀的样品环来加入样品。

柱的再生
再生通常先用2～3倍柱体积的去离子水洗涤，然后用新缓冲液(可以选择纯化蛋白的结合缓冲液)重新平衡。但在一些应用中，诸如变性蛋白质或脂质的物质在再生过程中不会被洗脱，通过在位清洗柱才能去除。

在位清洗(CIP)
如下一些现象说明柱子需要清洗

• 背压增加。
  
• 柱料有颜色变化。
  
• 分离效果降低。
  
• 上部适配器和凝胶表面有空隙。

去除沉淀蛋白、非特异性结合蛋白和脂蛋白
用0.5M NaOH清洗一个柱体积，去离子水或缓冲液平衡至中性。

去除一些强结合的疏水蛋白
用含去垢剂(如0.1% Triton X-100)的溶液清洗2倍柱体积。随后用洗脱液冲洗2～3倍柱体积洗去残留去垢剂。可以使用布氏漏斗清洗。

灭菌
灭菌将凝胶的微生物污染降至最低。针对GS4369和GS4381可以根据“基本信息”中推荐的线性流速用0.5M NaOH清洗柱子，再用3～5倍柱体积的无菌缓冲液重新平衡。针对GS4389和GS4401可以直接高温高压灭菌。
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